Kako prepoznati bakteriju

Sadržaj

• faze
• 1. metoda Identificirati bakteriju po Gramovoj mrlji
• Druga metoda Provesti Ziehl-Neelsenov test za bojenje
• Metoda 3 Proučite ponašanje i izgled bakterija
• Metoda 4 Interpretirati sve rezultate

U ovom članku: Identificirajte bakteriju bojenjem po Gramu Izvršite test bojenja Ziehl-NeelsenSproučite ponašanje i izgled bakterijaInterpretiranje svih rezultata43 Reference

Identifikacija bakterija je složen zadatak. Jedan od razloga je taj što, prema procjenama, na svijetu postoji između 10 000 i milijardu vrsta bakterija! Pravilno prepoznavanje bakterija vrlo je važno, osobito u medicinskom području, gdje pravilno liječenje bolesti uvelike ovisi o vrsti mikroba koji uzrokuje problem. U većini slučajeva identifikacija se vrši na temelju uklanjanja. Da biste identificirali bakteriju, morate izvršiti testove bojenja, analizirati njen izgled i promatrati kako dobro reagira na različite uvjete. Ako vam treba brz rezultat, uzmite DNK uzorak da biste ga poslali u laboratorij.

faze

1. metoda Identificirati bakteriju po Gramovoj mrlji

1. odrediti ako su bakterije Gram pozitivne ili negativne. Bojenje po Gramu način je dijeljenja bakterija između dvije najčešće vrste: gram pozitivno i gram negativno. Prve imaju debelu staničnu stijenku koja se sastoji od polimera koji se zove peptidoglikan, a koji ima najbolje obojenje kao tanki zidovi gram-negativnih bakterija.
   • Neke su uobičajene vrste gram-pozitivnih bakterija streptokoki, stafilokoki, mikrokoki (ili mikrokoki) i listerije.
   • Evo nekoliko uobičajenih primjera gram-negativnih bakterija: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium i Campylobacter.
2. Poduzmite odgovarajuće zaštitne mjere. Bakterije i kemijski elementi koje ćete koristiti tijekom ispitivanja predstavljaju rizik za vaše zdravlje. Nosite zaštitne naočale, rukavice od nitrila za jednokratnu upotrebu i laboratorijski kaput prilikom provođenja testa bojenja. Nakon što završite, stavite rukavice i sve ostale onečišćene materijale u posebnu vrećicu. Ne zaboravite slijediti postupke svog laboratorija kako biste riješili vrećicu kontaminiranih proizvoda.
3. Stavite uzorak za promatranje na stakleni tobogan. Za početak ispitivanja stavite kap ili bakterijski uzorak na sterilni tobogan. Zatim gurnite lopaticu preko Bunsenove plamenika upaljenog tri puta kako biste učvrstili uzorak i spriječili da izlazi s ploče prilikom ispiranja ili dodavanja reagensa.
4. Na lopaticu dodajte 5 kapi ljubičastog kristala. Izlijte pet kapi kristalno ljubičaste otopine na uzorak. Pričekajte malo da uzorak upije kristalnu ljubičicu.
   • Nož držite na mjestu s iglama za odjeću kako ne biste zaprljali ruke.
5. Temeljito operite oštricu kako biste uklonili mrlju. Upotrijebite slavinu ili bocu i pustite da voda teče vrlo sporo u trajanju do pet sekundi da biste uklonili ostatke tinte koji se nisu lijepili na uzorak.
6. Izlijte pet kapi gram gram diode na tobogan. Riječ je o otopini koja se sastoji od diode, natrijevog bikarbonata i kalijevog diodida koja uzrokuje otapanje kristalne ljubičice sa staničnim zidovima bakterija. Ulijte pet kapi otopine u uzorak i ostavite jednu minutu.
7. Uzorak operite alkoholom ili mliječnom kiselinom. Alkohol i laceton izbjeljujuće su tvari i eliminirat će mrlje u stanicama bakterija ako su po Gramu negativne. Nalijte nekoliko kapi izbjeljivača na uzorak i ostavite da djeluje ne više od tri sekunde. Nakon toga, pokušajte nježno ispirati vodom pet sekundi kako biste uklonili ta sredstva za izbjeljivanje.
   • Ako pustite da izbjeljivač djeluje dulje vrijeme, može doći do nestanka gram-pozitivnih mrlja, što rezultira lažnim negativnim.
8. Izvršite kontrastni test sa safraninom. Safranin je crvena boja koja je u kontrastu s kristalno ljubičastom bojom, čime se oboje bakterije koje ne utječu ljubičastom bojom. Izlijte oko pet kapi safranina na uzorak i ostavite jednu minutu. Nakon toga, pokušajte nježno ispirati vodom pet sekundi.
9. Vizualizirajte svoj uzorak pri 1000X uvećanju. Bakterije će postati ljubičaste ili ljubičaste ako je po Gramu pozitivno, ili ružičasto ako je po Graf negativno zbog safranina.

Druga metoda Provesti Ziehl-Neelsenov test za bojenje

1. Ovom se tehnikom otkrijte bakterije brze kiseline. Ove vrste sadrže veću količinu lipida, što ih čini otpornijim na boje koje se koriste u bojenju po Gramu. Kiseline otporne na bakterije pripadaju rodu Mycobacterium, koji uključuje bakteriju odgovornu za tuberkulozu (M. tuberculosis). Za bojenje bakterije otporne na kiselinu morate koristiti crvenu boju nazvanu karbolni fuksin, otporan na ispiranje otopinama kiseline ili sumporne kiseline.
2. Poduzmite odgovarajuće zaštitne mjere. Kemijski i biološki materijali koji se koriste tijekom Ziehl-Neelsenovog bojenja mogu biti opasni. Pored toga, morat ćete koristiti i izvore topline, poput Bunsenove mlaznice, električnog grijača ili alkoholne svjetiljke. Za provođenje testa slijedite upute u nastavku.
   • Obucite naočare, rukavice od nitrila i laboratorijski kaput.
   • Pazite da ne udišete pare iz boja i izbjeljivača i ne dopustite da vam kapljice poškrope oči ili kožu. Spremnike držite otvorenima pod poklopcem.
   • Budite vrlo oprezni prilikom zagrijavanja noža. Većina upotrijebljenih kemikalija je zapaljiva. Na toboganima ili drugoj opremi mogu se naći tragovi zapaljivih tvari.
3. Pripremite oštricu. Kružnim pokretima ravnomjerno rasporedite malu količinu bakterijskog uzorka u sredinu sterilnog stakala. Vaš uzorak treba zauzeti oko 10 mm do 20 mm.
4. Osušite oštricu. Postavite oštricu na strukturu za sušenje s uzorkom okrenutim prema gore. Ostavite da se prirodno osuši 30 sekundi. Ne pokušavajte sušiti nož krpom.
5. Osigurajte uzorak toplinom. S uzorkom prema gore, dva ili tri puta gurnite oštricu preko upaljenog Bunsen plamenika. Oštricu možete postaviti i na električni grijač postavljanjem temperature između 65 ° C i 75 ° C na najmanje dva sata. Pazite da uzorak ne prokuha ili ne prokuha.
6. U lopaticu dodajte karbolični fuksin. Izlijte nekoliko kapi ove otopine na tobogan. Ulijte dovoljno da u potpunosti prekrivate uzorak.
7. Zagrijte oštricu kako biste učvrstili boju. Pazljivo zagrijte klizno mjesto preko Bunsenove plamenika ili alkoholne lampe, s uzorkom usmjerenim prema gore, ili ga stavite na električni grijač. Lopaticu zagrijte na 60 ° C ili dok ne počne ispuštati pare. Pustite da boja djeluje pet minuta.
   • Ako koristite električni grijač, uključite ga na 60 ° C. Ako se odlučite za alkoholnu svjetiljku ili plamenik Bunsen, trebali biste očekivati ​​da ćete vidjeti pare.
   • Kako biste oštricu držali na željenoj temperaturi pet minuta, povremeno je zagrijavajte.
   • Pazite da uzorak ne prokuha, ne izgori ili osuši.
8. Operite lopaticu hladnom vodom. Ostavite da se ohladi pet minuta i lagano isperite nekoliko sekundi čistom vodom. Upotrijebite vodu iz slavine ili iscijedite bocu kako biste uklonili mrlje od boja koje se nisu lijepile na uzorak.
9. Izlijte na uzorak kiseli alkohol ili sumpornu kiselinu. Za potpuno prekrivanje uzorka koristite volumenski volumen od 3 vol.% (V / v) ili 20% sumporne kiseline. Ostavite da kiselina djeluje dok boja ne pocrni i postigne vrlo svijetlu ružičastu nijansu. Proces obično traje desetak minuta.
10. Za ispiranje oštrice koristite čistu vodu. Lagano operite oštricu ispod slavine ili pomoću boce za cijeđenje. Uklonite sve ostatke kiseline i boje.
11. Dodajte kontrastno sredstvo. Nakon što ste isprali tobogan, nalijte boju malahit zelene ili metilen plave boje. Ove dvije otopine stvaraju plavkastu ili zelenkastu pozadinu na kojoj će se pojaviti crvena boja, kao i drugi biološki materijali, poput ljudskih stanica i bakterija otpornih na kiseline. Pustite da tvari djeluju jednu do dvije minute.
12. Operite i osušite oštricu. Temeljito isperite vodom da biste uklonili suvišni kontrast. Nakon što završite, osušite stražnju stranu noža suhom krpom i ostavite da se prirodno osuši na postolju.
13. Vizualizirajte svoj uzorak pri 1000X uvećanju. Kiselootporne bakterije postat će crvene ili tamno ružičaste. Ostale bakterije, nebakterijske stanice i baza oštrice postat će zelena ili plava.

Metoda 3 Proučite ponašanje i izgled bakterija

1. Analizirajte oblik bakterija. Nakon provođenja testa bojenja kako bi se utvrdilo jesu li bakterije gram-pozitivne, gram-negativne ili kiseline, vrijeme je da se preciznije identificiraju vrste. Prvo analizirajte oblik bakterija na toboganu. Tri najčešća oblika su kokci (sferni), spirale i bacili (oblik šipka).
   • Postoji nekoliko varijanti ovih oblika. Bakterije okruglog oblika (kokci), na primjer, mogu se pojaviti u parovima (diplokoki), u lancima, hrpama ili u skupinama od četiri (tetrade).
2. Otkrijte je li bakterija aerobna ili anaerobna. Uzmi dva uzorka bakterija i stvori dvije odvojene kulture. Mjesec mora biti anaerobni (uzgaja se bez kisika), dok drugi mora biti aerobni (uzgajan kisikom). Čuvajte anaerobnu kulturu na 35 ° C na mjestu bez kisika najmanje 48 sati prije nego što promatrate rast.
   • Ako bakterije rastu u okruženju bez kisika, ali ne i ako su izložene kisiku, to znači da su anaerobne.
   • Iako se razvijaju u okruženju s kisikom, ali ne u nedostatku kisika, aerobni su.
   • Kada se razviju u oba okoliša, govorimo o fakultativnim anaerobnim bakterijama.
3. Izvršite test pokretljivosti. Bakterija je pokretna ako se može kretati sama s jednim ili više flagela. Stupanj pokretljivosti vrlo je važan u prepoznavanju određenih vrsta bakterija. Postoji nekoliko vrsta pokretljivosti, ali najsigurniji i naj čitljiviji način je polutvrdi medij.
4. Stvorite kulturu za test pokretljivosti. Pripremite kulturu bakterija u bujonu kulture. Slijedite donje upute za pripremu juhe po vašem izboru.
5. Kultura se inokulira u polučvrsti agar za testove pokretljivosti. Premažite dio kulture juhe sterilnom inokulacijskom iglom. Pažljivo posadite iglu u polučvrstu cijev dagar, poput TTC lagara, koju ste pripremili za test. Igla mora prodrijeti 2/3 agara.
   • Kad završite, pažljivo izvadite iglu pazeći da ne pređete granice zone inokulacije.
   • Inkubirajte epruvetu na 30 ° C 48 sati.
6. Pročitajte rezultat testa. Agar za test pokretljivosti pocrvenjet će u kontaktu s bakterijama. Ako su pokretni, ovaj crveni ili ružičasti ton će se širiti po cijeloj tvari. U suprotnom, bojenje će biti ograničeno na mjesto injekcije.

Metoda 4 Interpretirati sve rezultate

1. Skupite svoje komentare. Da biste znali vrstu bakterija, morat ćete prikupiti informacije dobivene iz kultura, testova bojanja i promatranja oblika. Ako pregledavate pacijentove uzorke, simptomi koje oni mogu također pomoći u određivanju odgovarajuće vrste bakterija.
   • Na primjer, ako testovi pokažu da su bakterije gram-negativne, anaerobne, ne-pokretne i primijetite simptome kao što su bol u trbuhu, mučnina i povraćanje kod pacijenta, vjerovatno je da pacijent pati od infekcije Bacteroidesom. fragilis.
2. Potražite u bazi podataka. Na svijetu postoje tisuće vrsta bakterija. Nemoguće je sve znati napamet. Vjerojatno ćete morati konzultirati kliničku mikrobiološku knjižicu ili internetsku bazu podataka kako biste usporedili rezultate ispitivanja s podacima o bakterijskim vrstama.
   • Postoje sjajni mrežni resursi za prepoznavanje bakterija, ali većina tih baza podataka dostupna je na engleskom jeziku, uključujući Patricbrc.org i GlobalRPh. Međutim, korisne informacije i dalje možete pronaći na web mjestu INRA-ovog međunarodnog centra za mikrobionske resurse.
3. Napravite genetski test kako biste znali točne vrste bakterija. U nekim će slučajevima možda trebati identificirati vrste bakterija. Najbrži i najjednostavniji način je izvršiti DNK test. DNK testovi također su korisni za identificiranje bakterija otpornih na tradicionalne oblike bojenja i kulture. Danas su DNK testovi na mikroorganizme vrlo brzi i mogu biti spremni za manje od dva sata.
   • Ako nemate pristup laboratoriju koji vrši genetičko sekvenciranje mikroorganizama, pošaljite uzorak bakterija specijaliziranoj agenciji.